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Some further optimization may be required. Prepare 0. Pt9 prostata the plate to UV nm light at appropriate distance and duration. UV exposure distance and duration depend on the UV lamp power. NOTE: Researcher-specified protein can be used for surface coating. Some commonly used proteins are collagen, fibronectin, and laminin. Pt9 prostata Different incubation methods can be applied depending on the protein used for coating.

Place a lid on the sample. UV sterilization Sterilize the sample under UV light in a biological safety cabinet for 30 min. All subsequent steps must be performed under sterile conditions. Plate the cells at the desired cell density. Cell density depends on the desired experiment. For monolayer cells, the imaging window should have the viewing field covered with a confluent layer of cells. Prepare insulin stock by reconstituting in acidified water 2.

Wait until the solution is clear, and then filter through a 0. Vortex the tube and aliquot into the desired pt9 prostata. Add 1. Data acquisition For each position, acquire at least one image of fiduciary particles and cells. Focus on the bead layer.

NOTE: Pixel size should be optimized based on size of the fiduciary particles and image processing method being used. In this application, the authors use a 10x 0. In general, it is helpful to retain a resolution of at least approximately pt9 prostata per bead; here, beads are polydisperse pt9 prostata have an individual size of nm. It is critical that the fluorescent fiduciary beads be in focus for images to be used for TFM calculations.

The focus and imaging quality of the beads should be prioritized over imaging the cells themselves. There should be no cross-talk between different channels, particularly any fluorescence not from the fiduciary beads which appears in the imaging spectra of the beads. Once all the positions of interest pt9 prostata been recorded, add detachment solution to each well to acquire force-free reference images of the fiduciary particles.

NOTE: The above is provided as an example of an effective detachment solution. Different detachment solutions pt9 prostata researchers' pt9 prostata may be used to detach the cells off the substrate surface. Image analysis Perform appropriate image analysis as desired.

NOTE: Analysis software was developed in-house. Image analysis may be done with custom-made software or software available online. Under a fume hood, prepare the three-neck pt9 prostata with a water-cooled reflux condenser. Add 0. Equip one neck with a rubber septum with a nitrogen inlet needle and an outlet needle and equip the other neck with a rubber septum for adding reagent with a syringe.

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Let the reaction run for 3 h after the solution becomes cloudy. After 3 h, place the flask in an ice water bath. Vacuum-filter the solution with coarse filter paper. Centrifuge the filtrate and re-suspend the click to see more in hexane. NOTE: The volume of the hexane to be added depends on the desired concentration of the bead solution.

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